Prosedur Kerja Tes TPHA - darahpemuda.com

 

 

 

PROSEDUR ASSAY

 

 

Biarkan sampel dan reagen mencapai suhu kamar dan pastikan sampel dan semua reagen disuspensi ulang sepenuhnya sebelum digunakan. Sampel tidak membutuhkan apapun pretreatment.

 

 

PROSEDUR KUALITATIF (PENYARINGAN)

 

 

Setiap pengujian membutuhkan 4 lubang dari satu piring mikrotiter.

1. Keluarkan Pengencer ke dalam pelat mikrotitrasi sebagai berikut:

- 25ml pada baris 1, 3 & 4 dan 100ml pada baris 2.

 

2. Tuangkan 25ml setiap sampel ke dalam lubang di baris 1.

- Aduk rata dan pindahkan 25ml dari baris 1 ke baris 2.

- Aduk rata dan pindahkan 25ml dari baris 2 ke baris 3.

- Aduk rata dan buang 25ml dari baris 3.

- Transfer 25ml dari baris 2 ke baris 4.

- Aduk rata dan buang 25ml dari baris 4

 

3. Tambahkan 75ml Sel Kontrol yang tercampur dengan baik ke baris 3.

 

4. Tambahkan 75ml Sel Tes yang dicampur dengan baik ke baris 4. Ketuk piring dengan lembut untuk mencampur. Pengenceran terakhir pada baris 3 dan 4 adalah 1/80.

 

5. Tutup dan diamkan pada suhu kamar selama 45 sampai 60 menit (sebagai alternatif piring bisa dibiarkan semalaman).

 

6. Periksa pola aglutinasi.

Catatan: Kontrol kit sudah ditentukan sebelumnya dan harus ditambahkan langsung ke masing-masing sumur di baris 3 dan 4 (tidak diperlukan pengencer).

 

 

 

ALTERNATIF ONE WELL DILUTION PROTOCOL UNTUK PENYARINGAN.

 

 

1. Keluarkan 190ml pengencer ke baris 1

 

2. Keluarkan 10ml sampel ke baris 1 dan campur

 

3. Buang 150ml dari baris 1

 

4. Tambahkan 25ml dari baris 1 ke baris 2

 

5. Tambahkan 75ml Sel Tes yang dicampur dengan baik ke baris 1 Tambahkan 75ml Sel Kontrol yang tercampur dengan baik ke baris 2Ketuk piring dengan lembut untuk mencampur. Pengenceran terakhir dalam sumur di baris 1 dan 2 adalah 1/80.

 

6. Tutup dan diamkan pada suhu kamar selama 45 sampai 60 menit (sebagai alternatif piring bisa dibiarkan semalaman).

 

7. Periksa pola aglutinasi.

 

 

 

PROSEDUR KUANTITATIF

 

Jika dimaksudkan untuk menghitung hasil positif secara rutin, prosedur skrining mungkin dilakukan dimodifikasi dengan menghilangkan Sel Kontrol dan menyiapkan hanya satu pengenceran akhir. Paling sampel akan menjadi negatif atau benar-benar positif, dan Sel Kontrol dapat digunakan dalam prosedur kuantitatif di bawah ini.

 

1. Siapkan pengenceran dalam pelat mikrotitrasi sebagai berikut:

- Untuk setiap sampel, keluarkan 25ml pengencer ke setiap sumur dalam satu kolom

piring. Untuk titrasi kontrol, pengeluaran harus dimulai dari baris 3.

- Pindahkan 25ml dari baris 2 dari pelat skrining asli ke baris 1 dari piring kuantitatif.

- Campur dan buang 25ml.

- Pindahkan 25ml dari baris 2 dari pelat skrining asli ke baris 2 dari piring kuantitatif.

- Siapkan pengenceran dua kali lipat 25ml dari baris 2 ke baris 8 (untuk kontrol penggandaan pengenceran harus dimulai dari baris 3).

 

2. Tambahkan 75ml Sel Kontrol yang tercampur dengan baik ke baris 1.

 

3. Tambahkan 75ml Sel Tes yang dicampur dengan baik ke baris 2 sampai 8.

 

4. Campur dengan mengetuk lembut. Pengenceran terakhir pada baris 1 dan baris 2 adalah 1/80.

 

5. Tutup dan diamkan selama 45 sampai 60 menit pada suhu kamar (atau semalaman).

 

 

 

HASIL DAN INTERPRETASI

 

 

Kontrol kit atau sampel nilai level yang diketahui harus diuji dengan setiap uji coba. Itu kontrol negatif kit harus memberikan hasil negatif setelah 45 menit. Kit itu positif kontrol harus memberikan hasil positif setelah 45 menit. Jika tingkat kontrol atau pengguna sampel yang diketahui tidak memberikan hasil yang diharapkan, hasil tes harus dianggap tidak valid.

 

Prosedur Penapisan

Sel-sel yang teraglutinasi membentuk lapisan rata di atas dasar sumur. Tidak diaglutinasi sel membentuk tombol kompak di tengah sumur. Bentuk sel yang diaglutinasi dengan lemah pola cincin yang khas. Aglutinasi Sel Uji tetapi bukan Sel Kontrol menunjukkan adanya antibodi spesifik terhadap T. palidum. Tidak adanya aglutinasi menunjukkan bahwa antibodi di bawah batas deteksi sistem. Jangan gunakan Pola sel kontrol sebagai indikasi hasil negatif karena memberi lebih banyak tombol kompak sel. Aglutinasi Sel Kontrol serta Sel Uji menunjukkan adanya antibodi anti sel.

 

Dalam hal ini tes tidak valid dan harus diulang. Jika tes tidak valid, tes harus diulangi setelah pertama kali melakukan penyerapan serum uji. Untuk mencapai ini, encerkan serum uji 1/4 dengan Kontrol Sel dan diamkan pada suhu kamar selama 45-60 menit. Setelah disentrifugasi sampel (1000rpm / 5 menit) encerkan 1/5 supernatan dalam Pengencer. Uji pengenceran ini secara langsung, tanpa pengenceran lebih lanjut, menggunakan suspensi Test dan Control Cell. SEBUAH uji konfirmasi FTA ABS juga direkomendasikan.

 

 

Prosedur Kuantitatif

 

Sebagai prosedur penyaringan. Titer adalah pengenceran tertinggi yang menunjukkan aglutinasi. Itu Serum Kontrol Reaktif harus menghasilkan titer dalam satu kali pengenceran 1/2560. Pengenceran awal untuk prosedur kuantitatif adalah 1/80. Titres 1/164000 telah terdeteksi dengan IMMUTREP TPHA tanpa prozon Efek (Hook).

 

 

PENYELESAIAN MASALAH

 

 

Tes hemaglutinasi sensitif terhadap efek panas, sinar matahari langsung dan getaran. Jauhkan dari sumber tersebut selama periode inkubasi pengujian. Jangan biarkan air liur mencemari sampel atau reagen karena akan menyebabkannya hasil yang salah. Gunakan ujung sekali pakai yang terpisah untuk setiap sampel untuk mencegah kontaminasi silang.

 

Ganti tutup semua reagen segera setelah digunakan Jangan biarkan reagen mengalir di sisi sumur. Sebelum pengujian dimulai bawa semua reagen ke suhu kamar (20 C sampai 25 C). Campurkan semua reagen dengan lembut inversi lembut atau berputar-putar. Untuk digunakan oleh operator dengan minimal pelatihan laboratorium dasar. Jangan gunakan komponen kit yang rusak atau terkontaminasi. Komponen kit cocok dan tidak boleh dipertukarkan.